تشخیص ویروس پیچیدگی برگ سیب زمینی به وسیله واکنش آرتی لمپ

آزمون تکثیر هم دمای وابسته به حلقه (lamp) تکنیک جدیدی برای تکثیر اسیدنوکلئیک تحت شرایط هم دما است که dna یا rna را با اختصاصیت، حساسیت، سرعت و کارایی بالایی تکثیر می کند. در این مطالعه برای اولین بار، ما rt-lamp را برای تشخیص ویروس پیچیدگی برگ سیب زمینی (plrv) به کار گرفتیم. در ابتدا das-elisa برای اطمینان از حضور ویروس در بین نمونه های جمع آوری شده انجام شد. با استفاده از استخراج rna از برگ های سیب زمینی آلوده به plrv، rt-pcr، rt-lamp یک مرحله ای و rt-lamp دو مرحله ای انجام شد. بنابراین آغازگرهای پیشرو و پسرو برای rt-pcr و مجموعه ای از شش آغازگر (f3, b3, fip, bip,lf, lb) برای دستیابی به این هدف طراحی شدند. واکنش rt-pcr بعد از یافتن نمونه های مثبت انجام شد. با استفاده از rna و cdna به عنوان الگو، بهینه سازی واکنش امتحان شد. پارامترهایی مانند غلظت mgso4، بتائین، آغازگرها، dntpها، dna پلیمراز و نیز دما و زمان که نقش مهمی را در rt-lamp بازی می کنند، سپس برای plrv امتحان شدند. آزمون های سرولوژیکی نیاز به دقت بالا دارند و زمان بر بودن و فراهم نمودن آنتی بادی های پرهزینه از دیگر مشکلات کاربرد این روشها هستند. واکنش rt-lamp در عرض 30 تا 40 دقیقه با حداقل یک نانوگرم بر میکرولیتر از cdna انجام شد در حالی که واکنش rt-pcr در بیشتر از دو ساعت با 40 نانوگرم بر میکرولیتر از cdna انجام شد. بنابراین می توان گفت که rt-lamp در مقایسه با rt-pcr سریع تر (4 برابر) و حساس تر (40 برابر) می باشد. همچنین واکنش rt-lamp در یک حمام آبگرم نیز انجام شد و ثابت شد که این آزمون نیاز به دستگاه ترموسایکلر ندارد و قادر است در آزمایشگاه های کوچک به کار گرفته شود. واکنش مثبت rt-lamp به واسطه کدورت ایجاد شده به وسیله تشکیل رسوب پیروفسفات منیزیم در خلال واکنش تشخیص داده شد. تشخیص آسان، تکثیر ساده و هزینه پایین از ویژگی های rt-lamp می باشد. ما پیشنهاد می کنیم تکنیک rt-lamp به واسطه خصوصیات منحصر به فرد خود، برای تشخیص دیگر ویروس های گیاهی به کار گرفته شود.